biologie

Correction exercice 2 chromatographie selon la charge

1 - Proportion des groupements diéthylaminoéthyls (DEAE : pKa = 9,4) chargés négativement aux pH : 2, 7, 9,4 et 12.

Le pH est donné par la relation suivante :


pH = 2:  log (base /acide) = pH - pKa = 2 - 9,4 = -7,4 donc  base/acide = 3,98 10 -6

Sachant que (A) + (B) = 100 % et que (B) = 3,98 10 -6  .(A),    on en déduit que 
(A) + 3,98 10 -6.(A) = 100

(A) est mis en facteur : (A) = 100 /(1 + 3,98 10-6)

On peut ainsi calculer le pourcentage des formes (A) et (B) : (A) = environ 100 % et (B) = 0 %

A pH = 7:  log (base/acide) = pH - pKa = 7 - 9,4 = -2,4  donc base/acide =  3,98 10-3

Sachant que (A) + (B) = 100 % et que (B) = 3,98 10-3.(A),    on en déduit que
(A) + 3,98 10-3.(A) = 100

(A) est mis en facteur : (A) = 100 /(1 + 3,98 10-3)

On peut ainsi calculer le pourcentage des formes (A) et (B) : (A) = 99,996 % et (B) = 0,004 %


A pH = 9,4 log (base/acide ) = pH - pKa = 9,4 - 9,4= 0  donc base/acide = 1

Sachant que (A) + (B) = 100 % et que (B) = (A),    on en déduit que (A) + (A) = 100

(A) est mis en facteur : (A) = 100 /(2)

On peut ainsi calculer le pourcentage des formes (A) et (B) : (A) = 50 % et (B) = 50 %




A pH = 12 :  log (base/acide) = pH - pKa = 12 - 9,4 = 2,6 donc base/acide = 398,1                                     

Sachant que (A) + (B) = 100 % et que (B) +398,1(A),    on en déduit que (A) + 398,1(A) = 100

(A) est mis en facteur : (A) = 100 /(1 + 398,1)

On peut ainsi calculer le pourcentage des formes (A) et (B) : (A) = 0,25 % et (B) = 99,75 %


Globalement, on peut donc constater qu'à un pH inférieur au pKa (pH acide), les groupements diéthylaminoéthyls se présenteront majoritairement sous forme acide (-NH+).

À l'inverse, à un pH supérieur au pKa (pH basique), les groupements diéthylaminoéthyls se présenteront majoritairement sous forme basique (-N)

2 - À pH = 7, on a pu calculer que la résine était à 99,996 % sous forme acide,

chargée positivement.


Ainsi, à pH = 7 la sérumalbumine et l'uréase sont chargées négativement, et seront donc retenues sur la colone. Le chymotrypsinogène ne sera pas retenus.





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