1 - Cet exercice met en jeu une chromatographie d'exclusion (encore appelée : tamisage moléculaire, gel filtration, perméation de gel). La connaissance du débit de la colonne (5 ml / min) et des différents temps de rétention nous permet de calculer le volume d'élution pour chaque composé (voir tableau), selon la relation :
Ve (volume d'élution) = d (débit) x tr (temps de rétention)
La représentation graphique du log de la masse moléculaire (log MM) qu'il faut calculer préalablement (voir tableau) en fonction du volume d'élution (Ve) nous donne une droite :
| MM | Log MM | tr (min) | Ve (ml) | |
| Aldolase | 145000 | 5,16 | 10,4 | 52 |
| Lactate déshydrogénase | 135000 | 5,13 | 11,4 | 57 |
| Phosphatase alcaline | 80000 | 4,9 | 18,4 | 92 |
| Ovalbumine | 45000 | 4,65 | 26,2 | 131 |
| Lactoglobuline | 37100 | 4,57 | 28,6 | 143 |
Le fait de visualiser une droite signifie qu'aucune protéine n'est exclue du gel.
2 - La glucokinase, avec un temps de rétention de 21 min, est éluée à un volume d'élution de 5 x 21 = 105 ml. Il suffit de se reporter au graphe pour déterminer un log de MM = 4,82 environ, soit une masse moléculaire de 66070 Da (ou 66070 g/mol ou 66,07 kDa), environ.
Ici, on a tracé le logarithme de la masse moléculaire en fonction du volume d'élution : log MM = f (Ve).
L'autre représentation serait de porter le logarithme de la masse moléculaire en fonction du KAV, le coefficient de partage entre la phase liquide et la phase gel : log MM = f (KAV).
KAV = (Ve - Vm) / (Vt - Vm)
Mais pour cela, il faudrait connaître le volume mort (Vm) et le volume total de la colonne (Vt).
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